Морфологичното изследване на клетъчните елементи от периферната кръв се осъществява посредством кръвна натривка, която трябва добре да се направи и оцвети.
Изготвяне на кръвни натривки
Използва се капилярна или венозна кръв. Необходими са добре почистени предметни стъкла. Приготвянето се извършва на 3 основни етапа:
- Разстилане – осигурява равномерно разпределение на клетките и запазване на структурните им особености. Качествената натривка трябва да обхваща 3/4 от дължината на предметното стъкло. Трябва да бъде равномерно дебела, а не на вълни, за да бъдат равномерно разпределени клетките. Началото трябва да е най-дебело, а краят най-тънък завършващ с четка. Кръвния пласт не трябва да достига до ръба на предметното стъкло, а да има няколко милиметра свободно пространство.
- Фиксиране – има за цел денатуриране на клетъчните белтъци и прилепване на клетките към предметното стъкло. Задължително условие е запазването на морфологията и прижизнената структура на клетките. Времето за фиксиране е различно при отделните фиксатори: металон 3 – 5 min, ацетон 5 min, етанол 20 min.
- Оцветяване – най-често се използва боята на Романовски-Гимза.
Методи за оцветяване
Оцветяване по Романовски-Гимза
Принцип. В зависимост от състава на различните части на клетката се оцветяват различно от оцветителния разтвор, който съдържа алкална съставка азур (има интензивно син цвят) и кисела съставка еозин, който има розово-червен цвят. Алкалните съставки на клетката се свързват и багрят от киселите бои, а киселите съставки от алкалните бой. Ядрото се оцветява от тъмно синьо до виолетово, а цитоплазмата в розово-червено.
Разтвора на Романовски-Гимза съдържа азур 2, еозин, глицерин и метанол.
Начин на оцветяване. Изсушена на въздух натривка е фиксира с определен фиксатор за определено време, след което се поставя хоризонтално. Натривката се залива внимателно, капка по капка с разреден разтвор от боята на Романовски-Гимза, така че стъклото да се покрие с дебел слой. Оцветяването продължава 20-40 min. Оцветителният разтвор се излива и натривките се промиват добре с дестилирана вода. Изсушават се на стайна температура.
Оцветяване по May-Grunwald.
Използва се боята на May-Grunwald, съдържаща смес от еозин + метиленблау, метилов алкохол и глицерин. След изсушаване на въздуха препаратът се залива направо с боята, без предварително фиксиране. След 3 – 5 min се отмива с дестилирана вода.
Оцветяване по Pappenhiem.
Нефиксирана натривка се залива с боята на May-Grunwald. След 3 – 5 min се добавя същото количество дестилирана вода. Оцветяването продължава още 1-2 min, след което боята се отлива и без да се измиват, натривките се заливат с разредения оцветителен разтвор.
